目 的

靈長類獸醫協會（APV，Association of Primate Veterinarians）意識到在非（fēi）人類靈（líng）長類動物（NHP，Non-human primate）中，腦（nǎo）脊液（yè）（CSF，Cerebro-Spinal Fluid）的（de）采（cǎi）集可能對於臨床和生物（wù）醫學研究都是必需的。由於這項技術存在固有風險，實驗動物獸醫應確定腦脊液采集對臨（lín）床評估的必要性和實用性（xìng）。為了（le）生物醫學研究目的（de）而進行腦脊液（yè）采集須在（zài）動物護理和使用委員會（IACUC，Institutional Animal Care and Use Committee）或等（děng）同的監管機（jī）構批準下進行。以下建議為IACUC、使用非（fēi）人（rén）類靈長類動物模型的研究人員以及獸醫人員提供（gòng）基（jī）本信息，以供（gòng）在製定腦脊液采集（jí）相關的政策和標（biāo）準操作程序（xù）（SOP，Standard Operating Procedure）時予以考慮。

背 景

腦脊液分析是（shì）一種強大的工具，可加（jiā）強（qiáng）對（duì）中樞神經係統內發生的各種過程的檢測（cè），例如：出血、炎（yán）症、感染、腫瘤和其他臨床情況。此外，對（duì）腦脊液中化合物（如激素、藥物（wù）、神經遞質、生物標誌物（wù）、代謝產物和（hé）病毒（dú））進行係列評估，在基礎（chǔ）研究和（hé）轉化研究（jiū）中同樣非（fēi）常重要（yào）。中樞神經係統中的（de）腦脊液體積可通過腦（nǎo）脊液的分泌和吸收而維持穩定。

操作（zuò）注意事項

腦脊液（yè）通常通過腦池或腰椎間隙穿（chuān）刺采集。其中，通過腰椎穿刺采集腦脊液的並發症風險相對（duì）較低。因為在（zài）大多數非人類靈長類動（dòng）物中，腰椎穿刺位點遠離脊髓的末端。應適當麻醉動物，並使用無菌技術（shù）進行操作（zuò），包括剃毛等術部準備和無菌材料的使用。至少（shǎo）需使用無菌手套、注射器和針頭，還可考慮使用無菌手術（shù）創巾。腦（nǎo）脊液采集（jí）通常以側（cè）臥位、胸骨臥位或（huò）坐（zuò）位進行，分別通過頸部或脊柱的屈曲來改善對（duì）腦池的進入或擴大椎間隙（Gereschlager，1987；Magden，2015；Wolf，2012）。選擇的針頭尺寸和長度應適合非人類（lèi）靈長類動物（wù）的種屬和體型（Brady，2000；Cereschlager，1987；Magden，2015；Wolf，2012）。操作時使用的技術、設備和（hé）耗材，以及圍手術期的護（hù）理因動物種屬、研究目的和臨床獸醫（yī）的偏好而不同。

有（yǒu）些研究方案可（kě）能（néng）需隨時間推移而連續采集腦脊（jǐ）液，或需采集（jí）未麻醉的受試對象的腦脊液樣（yàng）本。對於這些方案，可（kě）通過長（zhǎng）期植入的腦脊液穿刺導管從清醒狀態的恒河（hé）猴（hóu）身上連續采集腦脊液，而該導（dǎo）管（guǎn）可連接至皮下的（de）采集接入口（Gilberto，2003；Gilberto，2022；MacAllister， 2016）。

在編寫本文件時，作者盡一切（qiē）努力尋找總腦脊液體積的（de）數值、硬腦膜穿刺的次數限製或建議、采集頻率、安全的抽取體積以及腦（nǎo）脊液補充速率相關的最（zuì）新參考文獻。對於大多數靈長類動物，這方麵的文獻很有限（xiàn）。此外，采集方法也各不相同，因為從靈長類獸（shòu）醫協會成員收集的調查結果表明，各機構均可成功地使用多種不同的方法采集腦脊液。因（yīn）此，作者根據現有的最佳證據提供了腦（nǎo）脊液采集（jí）的考慮因素和建議。

作為參考（kǎo），先前的研究已確定成年雄性恒河猴（8.0-10.6kg）的表觀（guān）腦脊液體積為10+/-0.06 mL，腦脊液流速（sù）為0.018+/-0.003 mL/min（McCully，2020）。恒河猴的腦脊液形成速（sù）率範圍為（wéi）28.6-44.2 μL/min（Curran，1970；Lux，1975；Martins，1977）。在（zài）這方麵需要（yào）對非人靈長類動物進行進一步（bù）的研究（jiū），以促進更具指（zhǐ）導性建議的製定。

潛在不良（liáng）反應

雖然在非人類（lèi）靈（líng）長類動物中（zhōng）進行腦（nǎo）脊液采集時報道的並發症（zhèng）很少，但解剖變（biàn）異以及不適（shì）當（dāng）或技術不佳的操（cāo）作方法可能導致樣本受損或並發症（zhèng），如出（chū）血，腦疝，感染，腦幹、脊髓或神經（jīng）根損傷以及動（dòng）物的（de）不適。這些並發症雖然罕見，但可能會損害動（dòng）物（wù）福（fú）利。

由於存（cún）在風險，應由獸醫或經過培（péi）訓的獸醫人員采集腦（nǎo）脊液。對於（yú）未成功的腦脊液采集嚐試，實（shí）踐可能有所不同。常見做法是允許一個人進行最多三次未成功的嚐試。在第三次嚐試失敗後，應由另一位（wèi）合格的人員接替。如果第二個人在三次嚐試後仍無法采集到腦脊液，則停止嚐試。同時動物將接（jiē）受適當的鎮痛治療，並從（cóng）麻醉中（zhōng）恢複。在（zài）嚐試失敗後更換采集部位（例如從腦池到腰（yāo）椎）通常可成功。如果是（shì）未進行成像的失敗（bài）嚐試，則可使用X線透視輔助穿刺針放置。除提高成功率外，影（yǐng）像引導還可降低創傷（shāng）性穿刺的發生率（lǜ）。（Eskey，2001）

術後監（jiān）測應持續進行，直到動（dòng）物返回其（qí）籠內，並（bìng）能在沒有支撐的（de）情況下保持直立姿勢。對動物的監測應該至少持續24小時或根據IACUC批準的方案進行（háng）。監（jiān）測應包括對基本的生（shēng）理、行為和（hé）運動參數（shù）的評估。尤其應評估動物是否出現神經功能（néng）障礙（ài）的跡象，包括但（dàn）不（bú）限於嗜睡（shuì）、抑鬱（yù）、昏迷（mí）和頭部（bù）壓迫感等。在人類醫學中，腦脊液（yè）采集後出現的頭痛和（hé）由此引起的顱內低壓並不少見。考慮到非人類靈長類動物中的這種潛在（zài）後（hòu）遺症，應（yīng）在手（shǒu）術時給予（yǔ）鎮痛治療，並延（yán）長2-3天，或根據與頭痛或（huò）脊柱疼痛相關行為的術後觀察結果按需提供鎮痛（tòng）治療。最有效的鎮痛方案可能是術前即開始綜合治療。

IACUC注意事項和記錄保存

IACUC應了解腦脊（jǐ）液采（cǎi）集的相關工作（zuò）以（yǐ）及所有可能的並發症，並至少每年對其審查。所有相關信息，如藥物劑量、術前準（zhǔn）備、采集的腦脊液體（tǐ）積、采集頻率以及術後短期和長期恢複情況，均應在IACUC方案中進行描（miáo）述（shù），並（bìng）在醫療記錄或實驗室日誌中適當地記錄。

腦脊液可能是研究（jiū）方案中的（de）關鍵資料，但如果采集技術不恰當，可能會對動物福利產生影響。遞交（jiāo）方案時，應提供采集次數和頻率的科學（xué）依據。具體而言，IACUC還應（yīng）仔細評估涉及腦脊液（yè）采集（jí）的每個提案，並考慮（lǜ）以下問題：

1.腦脊液采集是否對實現方案中所述的科學目標至關重（chóng）要？

2.是否有替代方法和侵入性較小的中樞神經係統（tǒng）評價方法（如成像技術）可供選擇，如果有（yǒu），是否考慮過？

3.操作人員是否接（jiē）受過適當的培訓並（bìng）具備足夠的技能？

4.是否將提供適當的圍手術期麻醉和鎮痛方案？有關（guān）麻醉和鎮痛計劃，應谘詢實驗動物獸醫。

5.采集的腦（nǎo）脊液體積是否符合動物的年齡（líng）和體型考慮？

6.腦膜穿刺（cì）的次（cì）數和頻率是（shì）否（fǒu）適合動物（wù），以及並發症風險是否已降到最低？如果（guǒ）多次采集腦脊（jǐ）液（yè）為（wéi）研（yán）究的一部分，應明確規定（dìng）每隻（zhī）動物的最大采集次數。

7.術後監測計（jì）劃是否適當？

8.是否考（kǎo）慮（lǜ）了所（suǒ）有可能的術後並發症，並（bìng）列出了所有合理（lǐ）的幹預方（fāng）法，包括安樂死（sǐ）？

原文：

Association of Primate Veterinarian :Guidelines for Cerebrospinal Fluid Aspiration for Nonhuman Primates in Biomedical Research.