續接上篇

GA和突變係的背景特征

GA品係數量的激（jī）增（zēng）加劇了實驗齧齒類動物中未定義的“混合（hé）背景”問題。這對於那些需要用兩個獨立品係通過雜交子（zǐ）代開展的誘導（dǎo）性和（hé）條件性GA模型可能要給與更高的關（guān）注，例如Cre小鼠與Floxp小（xiǎo）鼠的雜交。

需特別關注GA品係背景的原因是即使擁有相同的突變基因，但如果動物遺傳背景不同，也（yě）可能表現（xiàn）出不同的表型。最早報道（dào）的（de）案例之一是經典的（de）糖尿病基（jī）因位點(Leprdb)突變，它在C57BL/6背景下會（huì）出現短暫的高血糖症，但在C57BLKS背景下（xià）卻出現明顯的糖尿（niào）病（bìng）症狀（zhuàng）。其他例子包括動物遺傳背景會對Egfr(表皮生長因子受體)敲除小鼠生存率造成影響，以及對Pten敲除小鼠的腫瘤發（fā）病率造成影響等。因此，每個（gè）GA品係都應該對其遺傳背景進行確認，了解其在現有的遺傳背景下是否會對預期表（biǎo）型有影響，從而選擇更（gèng）合適的遺傳背（bèi）景及對照動物。

對均勻分布，覆蓋全基因組的遺傳標記進行掃描，可以用於評估來自（zì）不同近交係的基因的比例，典型的遺傳背景界定主要用於（yú）區分（fèn）有可能混合的近交係背景（jǐng）。目前大部分應用（yòng）的場（chǎng）景是去區分C57BL/6和129的亞係，因為在構建基（jī）因敲除/敲入小鼠時，大量應用的（de）是129來源的（de）ES細胞，而幹細胞注射用的囊胚供（gòng）體通常會利用野生型的C57BL/6小鼠，因此如（rú）果在後續繁育中沒有進行回交，通常會得到B6;129混合遺（yí）傳背（bèi）景的（de）後代。混（hún）合遺傳背景的問題可以通過以下方法避免：

（a）將轉基因或核酸酶（Cas9-sgRNA）注入選定背景的近交係胚胎。

（b）在選定（dìng）背景品係來源的ES細胞中修改（gǎi）感興趣（qù）的基因。

（c）將嵌合體與用於構建的ES細胞來源（yuán）背景相同的小鼠品係進行雜交。

對於現有的GA品係，有（yǒu）必要去確認（rèn）其（qí）遺傳背景，如果（guǒ）需要在單一背景上建立品係，則需通過回交或是在遺傳標記輔助下回交的方式進行。定期用（yòng）背景品係進行回交也能最大（dà）限度地使遺傳背景保存一致。

遺傳（chuán）穩定（dìng）和冷凍保存方案

對於近交係、染（rǎn）色體置換係和同源（yuán）係，育種方法和遺傳穩定（dìng）計劃有助於最大限度地減少由於遺傳漂變造成的亞係分化，也有助於防止與其他品係意（yì）外（wài）雜交造成的遺傳汙染。為了減少遺傳漂變，應盡量減少（shǎo）內部育（yù）種（zhǒng）的傳代次（cì）數（shù），並將品係委托給專業機（jī）構通過冷凍（dòng）胚胎和/或精（jīng）子保存，國外如（rú）JAX、EMMA、MMRRC、IMSR、RIKEN，國內如國家遺傳工程小鼠資源庫等。同時應按照傑克遜實驗室遺（yí）傳穩定計劃(GSP)的建議，每10代更換一次（cì）繁殖種群（qún），以減緩遺傳漂變的積（jī）累。對於遠交係，應盡量減少近親繁殖，保持雜合度，同時也要管理遺（yí）傳（chuán）漂變，否則會導致品係分化。 理（lǐ）想情（qíng）況下，遠交係的（de）種群應該保持至少25個繁殖對，每代近交係（xì）數都應控製在1%以下。

胚胎和配（pèi）子的冷凍保存策略已被多個儲存庫采用，包括歐洲小鼠突變資源庫（EMMA/INFRAF RONTIER)、基因敲除小鼠計劃(KOMP)、傑克遜實驗室、動物資源與發展中心(CARD) 和RIKEN生物資（zī）源中（zhōng）心（xīn）。它們可以向實驗室（shì）提供冷凍保存的（de）材（cái）料（liào）或活體小鼠（shǔ）。這些儲存庫有助於向（xiàng）全（quán）世界的科學界提供已經建立的品係，並為可能丟（diū）失的品係提供備份。國際小鼠品（pǐn）係數據庫(IMSR)是一個可在線搜索的數據庫，集成了世界範圍內的小鼠品係、庫存和突變ES細胞（bāo）係，包含近交係、突變係和基因工程小鼠。

參考文獻：

[1] Benavides F , T Rülicke,  Prins J B , et al. Genetic quality assurance and genetic monitoring of laboratory mice and rats: FELASA Working Group Report:[J]. Laboratory Animals, 2020, 54(2):135-148.